細(xì)胞培養(yǎng)為什么要嚴(yán)格控制環(huán)境條件
細(xì)胞培養(yǎng)屬于一項(xiàng)精細(xì)的工作, 就環(huán)境條件的把控而言, 乃是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)起直接決定作用的情況。有許多人會(huì)認(rèn)為, 只要將細(xì)胞放置進(jìn)培養(yǎng)箱便一切妥當(dāng), 實(shí)則并非如此簡(jiǎn)單。溫度、濕度以及二氧化碳濃度, 這些基礎(chǔ)性質(zhì)的參數(shù), 其中每一項(xiàng)實(shí)際都需要無比精確地予以維持。
培養(yǎng)箱一般將溫度設(shè)定為37攝氏度, 此數(shù)字并非隨意而定, 乃是對(duì)人體內(nèi)生理環(huán)境予以模擬, 一旦溫度波動(dòng)超出1度, 細(xì)胞的代謝節(jié)奏便會(huì)被擾亂, 生長(zhǎng)速度顯著變緩, 甚而會(huì)出現(xiàn)形態(tài)異常, 濕度與培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)有所關(guān)聯(lián), 當(dāng)濕度很低時(shí), 培養(yǎng)基就會(huì)發(fā)生濃縮, 細(xì)胞的滲透壓會(huì)失去平衡。
同樣關(guān)鍵的是二氧化碳濃度, 大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需用含碳酸氫鈉的培養(yǎng)基, 這種培養(yǎng)基的pH值靠二氧化碳維持平衡, 培養(yǎng)箱里二氧化碳濃度一般設(shè)定為5%, 此數(shù)值是經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證適合大多數(shù)細(xì)胞類型的濃度。
對(duì)于實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境而言, 除了硬件條件, 潔凈程度也是不能忽略的。超凈工作臺(tái)的使用情況, 空氣的消毒狀況, 操作人員的衛(wèi)生習(xí)慣如何, 這當(dāng)中的每一個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)對(duì)培養(yǎng)結(jié)果造成影響。好多新手往往容易疏于手部消毒這一情況以及實(shí)驗(yàn)服的清潔方面, 然而這些細(xì)節(jié)恰恰就是污染的源頭所在。
細(xì)胞培養(yǎng)多久傳代一次比較合適
細(xì)胞培養(yǎng)里頭, 傳代屬于極為關(guān)鍵的操作之一, timing 的精準(zhǔn)把控, 會(huì)對(duì)細(xì)胞的健康狀況產(chǎn)生直接影響。各式各樣的細(xì)胞系, 其生長(zhǎng)速度存在著顯著差異, 部分細(xì)胞增殖速度飛快, 兩三天的時(shí)間便能夠?qū)⑴囵B(yǎng)瓶底部鋪滿；另外一些細(xì)胞生長(zhǎng)速度遲緩, 需要耗費(fèi)一周以上的時(shí)長(zhǎng), 才可以達(dá)到適宜的密度。
檢驗(yàn)傳代時(shí)機(jī)主要瞧細(xì)胞的融合度, 一旦細(xì)胞覆蓋培養(yǎng)之表面達(dá)成80%至90%之際, 便是傳代的最佳時(shí)候, 此時(shí)細(xì)胞處在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期當(dāng)中, 活力最為強(qiáng)盛, 傳代之后的復(fù)蘇成效最為良好, 要是等到細(xì)胞全然融合甚至堆積于一塊而去傳代, 細(xì)胞會(huì)步入衰老狀態(tài), 貼壁能力降低, 后續(xù)造就會(huì)極為艱難。
針對(duì)于一些生長(zhǎng)速度較快的細(xì)胞系，諸如某些腫瘤細(xì)胞系, 或許每?jī)商炀偷脗鞔换?。而像原代?xì)胞或者某些特別的細(xì)胞類型, 或許要有更長(zhǎng)的間隔時(shí)間。知曉所培育細(xì)胞的生長(zhǎng)習(xí)性, 記錄每次傳代時(shí)的時(shí)間以及是怎樣的細(xì)胞狀態(tài), 創(chuàng)建自身的實(shí)驗(yàn)日志, 這就是開展好細(xì)胞培養(yǎng)所需練就的基本功。
進(jìn)行傳代操作這件事, 本身是存在講究之處的。對(duì)于消化時(shí)間的把控, 那是特別關(guān)鍵的, 要是胰蛋白酶發(fā)揮作用的時(shí)間太長(zhǎng), 就會(huì)對(duì)細(xì)胞膜蛋白造成損傷, 要是時(shí)間過短, 細(xì)胞又沒辦法充分地脫落下來。要去觀察細(xì)胞形態(tài)的變化情況, 并且及時(shí)對(duì)操作節(jié)奏作出調(diào)整, 達(dá)成這一點(diǎn)是需要有一定的經(jīng)驗(yàn)積累的。
細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)污染應(yīng)該如何預(yù)防
細(xì)胞培養(yǎng)面臨眾多問題, 其中污染最讓人頭疼, 辛辛苦苦培養(yǎng)許久得來的細(xì)胞, 一朝遭受菌體侵染或許便會(huì)統(tǒng)統(tǒng)損耗毀滅掉；細(xì)菌導(dǎo)致培養(yǎng)基沾染雜質(zhì)變?yōu)闇啙嵝螒B(tài), 于顯微鏡下能夠看到好些不停游動(dòng)的細(xì)菌微粒和小顆粒；真菌介入的話是能瞧見那些細(xì)細(xì)小小如同絲線纏著的菌絲以及孢子, 在這個(gè)過程中它們的生長(zhǎng)速度是挺快的節(jié)奏；支原體帶來的污染比較隱藏不能輕易察知, 它不會(huì)致使培養(yǎng)基被打亂變得渾濁, 然而卻會(huì)極大程度上擾動(dòng)細(xì)胞處于培養(yǎng)狀態(tài)時(shí)的生長(zhǎng)特性進(jìn)而影響相關(guān)實(shí)驗(yàn)最終得出的各種結(jié)果。
防止污染的關(guān)鍵之處在于使操作符合規(guī)范。進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之時(shí)要去更換專門用于實(shí)驗(yàn)的衣服以及拖鞋, 在實(shí)驗(yàn)開展的進(jìn)程當(dāng)中要盡可能地把動(dòng)作的幅度給減小, 防止因?yàn)榭焖俚刈邉?dòng)從而引發(fā)氣流出現(xiàn)擾動(dòng)現(xiàn)象。超凈工作臺(tái)的紫外燈在實(shí)驗(yàn)開始之前要有足夠的照射時(shí)長(zhǎng), 通常給出的建議是三十分鐘以上。進(jìn)行操作之際要把酒精燈點(diǎn)燃, 借助熱氣流去構(gòu)建起局部的無菌范圍。
微生物培養(yǎng)用的培養(yǎng)皿以及用于準(zhǔn)確移取液體的移液器, 它們的無菌操作在日常工作里, 確確實(shí)實(shí)是那些極易出現(xiàn)狀況的環(huán)節(jié)部分。開啟蓋子的時(shí)候, 所花費(fèi)的時(shí)間務(wù)必要盡全力縮短一些, 蓋子的內(nèi)側(cè)表面應(yīng)當(dāng)朝著上方放置起來, 在進(jìn)行移液這個(gè)操作的時(shí)候, 吸取液體用的吸頭一定不要去觸碰容器的內(nèi)部壁面。像這些看起來好像十分細(xì)微、不太起眼的動(dòng)作, 事實(shí)上每一個(gè)都在不斷地累積著潛在的風(fēng)險(xiǎn)。
周期性地對(duì)培養(yǎng)環(huán)境的潔凈程度進(jìn)行檢測(cè)這一行為也是具備相當(dāng)重要性的, 能夠于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放置營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板, 使其暴露一段時(shí)長(zhǎng)之后去觀察是不是存在菌落生長(zhǎng)的情況, 借由這種方式來對(duì)實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生情形予以評(píng)估, 一旦察覺到異常就要即刻展開處理, 將問題化解在剛剛萌生的狀態(tài)之中。
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